細(xì)胞凍存的基本原理： 慢凍

手動(dòng)降溫：將細(xì)胞依序放在4℃（30分鐘）、-20℃（1小時(shí)）、-80℃（*）后移至液氮中保存。

程序降溫盒：是一般*廣泛使用的降溫法，為一種特制冷凍容器（填充異丙醇或依靠特制金屬導(dǎo)熱），使細(xì)胞以每分鐘約-1℃的速度降至-80℃（*），然后移至液氮中保存。

大家可以根據(jù)自身情況或者實(shí)驗(yàn)條件選擇不同的凍存方式。

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。

細(xì)胞代謝過(guò)程需要各種蛋白酶的參與，而這些蛋白酶在環(huán)境溫度低于-70℃時(shí)會(huì)集體罷工，低溫貯藏的目的是通過(guò)低溫使代謝活動(dòng)近乎停止。細(xì)胞因此進(jìn)入休眠狀態(tài)，使細(xì)胞“不會(huì)老”，可以長(zhǎng)期保存。

因?yàn)閮鋈谶^(guò)程對(duì)所有細(xì)胞和組織都是有一定傷害的，因此，需要開(kāi)發(fā)出有效的技術(shù)來(lái)防止細(xì)胞死亡和損傷。

這時(shí)，低溫保護(hù)劑就發(fā)揮出它的作用了。

低溫保護(hù)劑可保護(hù)細(xì)胞不受細(xì)胞內(nèi)冰凍影響，目前多采用DMSO、甘油、*和丙二醇等滲透型低溫保護(hù)劑。它們的作用機(jī)制包括：自由進(jìn)入細(xì)胞，取代水，使冰點(diǎn)下降，充當(dāng)鹽的二次溶劑，提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性。

但是，部分低溫保護(hù)劑在緩慢冷凍過(guò)程中雖然會(huì)保護(hù)細(xì)胞，但它們也會(huì)引起細(xì)胞毒性，尤其是在室溫下。因此，在標(biāo)準(zhǔn)的自制凍存液中，會(huì)含有血清，血清是用來(lái)降低細(xì)胞毒性的，但血清也不是*的。