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ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術。ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗C3抗體、HRP標記的親和素,經(jīng)過洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
1.定性測定
(1)ELISA試劑盒陽性判定值法(cut-offvalue,CO值):一般為陰性對照的平均A值加一個常數(shù),試劑制備嚴格標準化,要先計算出陽性對照A值平均數(shù)和陰性對照A值平均數(shù)。標本A值≥CO值即為陽性。
(2)抑制率法:在競爭抑制法中結果可用抑制率表示。
抑制率(%)=(A陰性對照A-A待測)/陰性對照X100%,一般以抑制率≥50%為陽性試劑盒。
2.半定量測定
結果一般以滴度表示。將標本連續(xù)稀釋后,進行ELISA檢測,在陽性臨界值以上的稀釋度即為該標本的“滴度”。
3.定量測定
即用己知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA試劑盒測定,與待測標本同時進行測定,繪制標準曲線,結果以*量或活性單位表示之。
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