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核酸檢測試劑盒叫熒光PCR探針法。
試劑盒里分好幾部分,*重要的是PCR反應(yīng)體系:DNA聚合酶,鎂離子,引物(新冠測2個基因和1個內(nèi)標(biāo)需要3對引物),探針(也要3對探針,發(fā)出三種波長的熒光),逆轉(zhuǎn)錄酶,dNTP(ATUCG會用部分U代替T),還有用于抗干擾的UDG酶(正常的DNA只有ATCG,PCR擴(kuò)增出來的DNA會有AT(會用部分U代替T)CG,這樣擴(kuò)增出來的DNA鏈中有U,UDG酶能切斷含U的DNA鏈,所以擴(kuò)增DNA在空氣中形成的氣溶膠,不會影響其他樣本)、RNA酶抑制劑(空氣中液體里全都是RNA酶,會降解病毒的RNA)、Taq酶的抗體(Hot start,常溫下能抑制Taq酶的活性,PCR擴(kuò)增時高溫讓其失活,Taq酶就在高溫時恢復(fù)活性開始擴(kuò)增了)。
還有陰陽性對照,陰性為水,陽性通常的合成的DNA,新冠的N基因和ORFlab基因和內(nèi)標(biāo)基因。
內(nèi)標(biāo)的作用通常為人的基因,所有的樣本結(jié)果內(nèi)參基因有擴(kuò)增曲線,否則無效。
反正流程:核酸提取,逆轉(zhuǎn)錄,cDNA高溫95℃變性(同時Taq酶的抗體失活),剩下變性到退火延伸很多次循環(huán),*就得到結(jié)果了。熒光PCR儀的作用在擴(kuò)增的同時能夠監(jiān)測探針的發(fā)光,得知擴(kuò)增后DNA的量。
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